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Preparation of Surgical Materials and Cancer Cells Before the day of surgery, autoclave the micro-dissecting scissors, Graefe forceps, Graefe tissue forceps, needle holder with suture cutters, and the appropriate number of drapes. NOTE: Perform all tissue culture under sterile conditions, and verify that all cell lines are mycoplasma-free.

The murine prostate cancer cell line utilized in this study, Myc-CaP 32is transduced to stably express both firefly luciferase and mCherry.

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Count the cells and resuspend the cells in Calcoli nella prostata e nella vescica original song list at a concentration of 6.

NOTE: Perform intra-prostatic injections within 3 h of preparing matrigel cell suspensions. If performing intra-prostatic injections on more than 5 mice, repeat the above steps to prepare a fresh matrigel cell suspension.

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Pre-operative mouse preparation NOTE: House mice in the university animal facility for at least one week before surgery to allow for adequate adaptation and to minimize animal stress. Verify full induction by the loss of toe pinch reflex. Weigh the mice and administer at least 0. Apply ophthalmic ointment lubrication to both eyes to prevent corneal drying. Shave all fur from the abdomen. Sterilize the abdomen by three rounds of circular application of surgical scrub using sterile non-adhering pads followed by sterile alcohol wipes.

Allow the abdomen to dry. NOTE: For the rest of the surgical procedure, only sterile gloves and surgical instruments can contact the sterilized mouse abdomen. Transfer the mouse supine onto here clean surface on a heating pad directly calcoli nella prostata e nella vescica original song list the objective of a clean surgical microscope.

Cover the mouse with a sterile drape with a small hole cut over the abdomen. Perform an approximately 1 cm incision of the outer skin along the midline of the abdomen superior to the penis and the preputial glands Figure 1D.

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Separate the connective tissue between the outer abdominal skin and the inner abdominal musculature by opening the scissors between the layers. Perform a similar incision of the inner abdominal musculature while using forceps to raise the musculature to avoid puncturing the intestines or bladder Figure 1D.

The anterior prostate lobes are translucent and attached to the lesser curvature of the white seminal vesicles.

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Gently raise the tip of the seminal vesicle using the Graefe tissue forceps to create tension on the tissue without puncturing the seminal vesicle Figure 1E. Carefully insert the bevel of the needle parallel to the long axis of the anterior prostate lobe.

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Verify adequate injection by engorgement of the anterior prostate lobe Figure 1G. Carefully hold the seminal vesicle and injected prostate lobe outside of the mouse for approximately link s to allow matrigel to partially solidify within the lobe. During this time, collect any cell solution leakage in the abdomen using a sterile polyester tipped applicator to prevent non-orthotopic tumor development, without pressing on the calcoli nella prostata e nella vescica original song list prostate lobe.

Carefully return the seminal vesicle and injected prostate lobe into the abdomen without putting pressure on the lobe.

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Replace any externalized tissues. Perform continuous sutures to close the inner abdominal musculature with vicryl absorbable reverse cutting needle sutures. Perform interrupted sutures to close the outer abdominal skin with nylon monofilament non-absorbable reverse cutting needle sutures. NOTE: Sterilized 9 mm staples can also be used to close the outer abdominal skin.

However, in contrast to sutures, they interfere with any subsequent bioluminescent and fluorescent tumor imaging signal. Clean all tools with sterile ethanol wipes opened by the surgeon assistant and place them in a glass bead sterilizer for 30 s.

Allow the tools to dry before use on the next mouse. Flush the syringe and needle calcoli nella prostata e nella vescica original song list sterile saline opened by the surgeon assistant to prevent clogging by remnant matrigel.

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Il collo viene controllato per la flessibilità. Tutti i campi polmonari vanno esaminati mediante percussione e auscultazione.

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Va sempre valutata l'entità delle escursioni respiratorie lo spostamento del diaframma e la capacità di espansione del torace. La schiena viene https://gowin.shop/articles/14-11-2019.php per scoliosi e dolorabilità. Negli uomini e donne, il seno deve essere esaminato ogni anno per irregolarità e noduli. Per le donne, è talvolta raccomandata l' autoesaminazione.

Lo screening mammografico è anche raccomandata in particolare per le donne che hanno un'anamnesi familiare di cancro al seno.

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L'auscultazione va effettuata in modo sistematico battito, regolarità, soffi, click, e sfregamenti. Un ritmo irregolare suggerisce fibrillazione atriale.

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calcoli nella prostata e nella vescica original song list Raggiunge il picco al principio della sistole ed è raramente sentito nelle arterie carotidee.

Raramente, la sclerosi della valvola aortica progredisce a valore emodinamico e calcificazione; anche se non frequente, la sclerosi della valvola aortica è oggi la lesione più frequente che porta a stenosi aortica sintomatica e necessità di trattamento. Tuttavia, soffi sistolici possono essere dovuti ad altre disfunzioni, che devono essere individuate:. Stenosi aortica valvolare: questo soffio, contrariamente a quello della sclerosi valvolare aortica usuale, raggiunge il picco più tardivamente durante la sistole, viene trasmesso alle arterie carotidi, ed è forte maggiore di grado 2 ; il 2 j tono cardiaco è smorzato, la pressione differenziale è ridotta, e la salita carotidea è rallentata.

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Inoltre, in molti pazienti anziani con stenosi della valvola aortica, la salita carotidea non rallenta perché la compliance vascolare è diminuita. Insufficienza mitralica : questo soffio è solitamente più forte al vertice e si irradia all'ascella. Cardiomiopatia ipertrofica ostruttiva : questo soffio si intensifica quando i pazienti fanno una manovra di Valsalva.

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Soffi diastolici risultano anormali in persone di ogni età. Il quarto tono cardiaco è frequente tra gli anziani senza evidenza di un disturbo cardiovascolare ed è comunemente assente tra le persone anziane con evidenza di un disturbo cardiovascolare.

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Se si sviluppano nuovi sintomi neurologici o cardiovascolari in pazienti con un pacemaker, è necessario valutare la presenza di suoni cardiaci variabili, di soffi, delle pulsazioni, oltre che di ipotensione e calcoli nella prostata e nella vescica original song list insufficienza cardiaca. In alcuni pazienti in particolare quelli magriun'aorta normale è palpabile, ma il vaso e le pulsazioni non si estendono lateralmente. Lo screening ecografico dell'aorta addominale è raccomandato per tutti gli anziani che non hanno mai fumato.

Il fegato e la milza vanno palpati per controllare eventuali tumefazioni. Vengono testati la sensibilità e il riflesso anale.

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Si effettua anche la https://gowin.shop/insaturi/bbw-moglie-prostata-mungitura.php del sangue occulto nelle feci. La prostata viene palpata per valutare la presenza di noduli, dolorabilità e la consistenza. Regolari esami pelvici, con il test di Papanicolaou Pap test ogni anni fino all'età di 65 anni, sono raccomandati.

Una volta che il Pap test è stato interrotto, viene riavviato solo se si sviluppano nuovi sintomi o segni di un possibile disturbo. Per le donne isterectomizzate, il Pap test è necessario solo se è rimasto tessuto cervicale. Le ovaie non sono palpabili calcoli nella prostata e nella vescica original song list anni dopo la menopausa; ovaie palpabili suggeriscono una neoplasia.

Le pazienti devono essere esaminate per verificare la presenza di prolasso dell'uretra, della vagina, della cervice e dell'utero. Gli viene chiesto di tossire per verificare la perdita di urina e di prolasso intermittente. Le articolazioni vengono esaminate per verificare la presenza click here dolorabilità, tumefazione, sublussazione, crepitio, calore, rossore, e altre anomalie, che possono suggerire una patologia:.

Noduli di Heberden formazioni ossee a carico delle articolazioni interfalangee distali o noduli di Bouchard formazioni ossee a carico delle articolazioni interfalangee prossimali : artrosi.

Sublussazione delle articolazioni metacarpofalangee con deviazione ulnare delle dita: artrite reumatoide cronica. Va valutato il range attivo e passivo del movimento articolare. La presenza di retrazioni va sempre attentamente valutata. La diagnosi e il trattamento dei problemi del piedefrequenti con l'età, aiutano gli anziani a mantenere la loro indipendenza.

Il calcoli nella prostata e nella vescica original song list a martello iperflessione dell'articolazione interfalangea prossimale e il dito ad artiglio iperflessione delle articolazioni interfalangee prossimali e distali possono interferire con le attività funzionali e quotidiane.

Le deformità delle dita dei piedi possono derivare dall'avere indossato per anni scarpe poco sagomate o da artrite reumatoide, diabete, o disturbi neurologici p.

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Di tanto in tanto, i problemi ai piedi sono indicativi di altre malattie sistemiche Manifestazioni di patologie sistemiche a carico del piede. L'esame neurologico dei pazienti anziani è simile a quello di ogni adulto.

Tuttavia, malattie non neurologiche che sono diffuse tra gli anziani possono complicare tale valutazione. Per esempio, deficit visivi e dell'udito possono ostacolare la valutazione dei nervi cranici, e periartriti infiammazione dei tessuti intorno a calcoli nella prostata e nella vescica original song list in alcune articolazioni, in particolare spalle e anche, possono interferire con la valutazione della funzione motoria. Segni simmetrici non accompagnati da perdita funzionale, e altri sintomi e segni possono essere osservati nei pazienti anziani.

Il medico deve decidere se questi reperti giustificano una valutazione dettagliata per verificare la presenza di un'eventuale lesione neurologica. I pazienti devono essere rivalutati periodicamente per eventuali modificazioni link, asimmetrie e nuovi sintomi.

La calcolosi urinaria e l'ipertrofia prostatica

Questi cambiamenti si verificano normalmente con l'invecchiamento. In molte persone anziane, il senso dell'olfatto è diminuito perché hanno un minor numero di neuroni olfattivi, hanno avuto numerose infezioni delle vie respiratorie superiori, o hanno rinite cronica.

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Tuttavia, la perdita asimmetrica perdita dell'olfatto in una narice è anormale. Deficit visivi e uditivi possono derivare da anomalie negli occhi e nelle orecchie piuttosto che nelle vie nervose.

I pazienti possono essere valutati per tremore durante la stretta di mano e altre semplici azioni.

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Gli anziani, in particolare quelli che calcoli nella prostata e nella vescica original song list fanno regolarmente allenamento della forza, possono apparire deboli durante i test di routine. Se la debolezza è simmetrica, non infastidisce il paziente, e non ha cambiato la funzionalità o il livello di attività del paziente, è probabilmente dovuta ad un disuso piuttosto che ad una malattia neurologica.

Rafforzare le estremità superiori è anche utile per la funzione generale. La sarcopenia una diminuzione della massa muscolare è un frequente reperto età-correlato.

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È irrilevante a meno che non sia accompagnata da un declino o da cambiamento nella funzionalità p. La sarcopenia colpisce in particolare i muscoli della mano p.

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La debolezza dei muscoli estensori del polso, delle dita e del pollice sono frequenti tra i pazienti che fanno uso di sedie a rotelle poiché la compressione del braccio click at this page il bracciolo danneggia il nervo radiale. Viene testata la coordinazione motoria. Tutti gli calcoli nella prostata e nella vescica original song list del passo vanno valutati; questi includono l'inizio del cammino; la lunghezza, l'altezza, la simmetria, la continuità, la frequenza ritmo del passo; la velocità velocità di cammino ; la larghezza del passo; la postura del cammino.

Devono essere considerate calcoli nella prostata e nella vescica original song list sensibilità, il controllo motorio e muscolo-scheletrico, e l'attenzione, che sono necessari per un cammino indipendente e coordinato. Passi più corti, forse perché i muscoli del polpaccio sono deboli o perché l'equilibrio è scarso. Movimento ridotto in alcune articolazioni p. Leggeri cambiamenti nella postura del cammino p.

L'invecchiamento ha poco effetto nella cadenza del cammino o nella postura; in genere, gli anziani camminano dritti, a meno che non sia presente una malattia Alcune cause di disfunzione della deambulazione. Claudicatio neurogena dolore, debolezza, e intorpidimento e che si verifica durante la deambulazione e si riduce stando seduti. Nel complesso il controllo posturale è valutato utilizzando il test di Romberg pazienti in piedi con i piedi uniti e gli occhi chiusi.

La sicurezza è di primaria importanza, il clinico che esegue il test di Romberg deve essere in una posizione tale da prevenire la caduta del paziente. Vengono controllati i riflessi osteotendinei.

L'invecchiamento in genere ha poco effetto su di questi. Un riflesso asimmetrico del tendine di Achille di solito indica una malattia p. I riflessi da rilascio corticale noti come riflessi patologiciche comprendono il riflesso del grugno, della suzione e il riflesso palmomentoniero, comunemente si verificano nei pazienti anziani in assenza senza disturbi cerebrali rilevabili p.

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Un riflesso di Babinski risposta estensoria plantare nei pazienti anziani è anormale; è indicativo di una lesione del motoneurone superiore, spesso di una spondilosi cervicale con compressione midollare parziale.

La valutazione della sensibilità comprende la sensibilità tattile con una punta sottilela funzione sensoriale corticale, la sensibilità termica, la propriocezione percezione della posizione delle articolazionie la valutazione della sensibilità vibratoria.

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L'invecchiamento ha effetti limitati sulla sensibilità. Molti pazienti anziani riferiscono formicolio, specialmente ai piedi. Tuttavia, i pazienti con formicolio devono essere controllati per eventuali neuropatie periferiche. Molte persone anziane perdono la sensibilità vibratoria sotto le ginocchia. Viene persa perché si modificano i piccoli vasi nella colonna posteriore della sclerosi del midollo spinale.

Tuttavia, la propriocezione, che si pensa utilizzi una via simile, non è compromessa. Un esame dello stato mentale è importante.

Calcolosi vescicale - Dott. Stefano Casellato

I pazienti che sono disturbati da tale prova devono essere rassicurati sul fatto che si tratta di un esame di routine. Determinare lo stato mentale di calcoli nella prostata e nella vescica original song list paziente che presenta un disturbo del linguaggio p.

Anomalie in queste aree non possono essere attribuite esclusivamente all'età, e se si notano anomalie, è necessaria un'ulteriore valutazione, tra cui una prova formale dello stato mentale. Con l'invecchiamento, l'elaborazione delle informazioni e i processi mnesici rallentano ma sono essenzialmente inalterati.

Con del tempo in più e con l'incoraggiamento, i pazienti svolgono queste funzioni in modo soddisfacente a meno che non sia presente un'anomalia neurologica. L'invecchiamento modifica l'interpretazione di molte misure che riflettono lo stato nutrizionale nelle persone più giovani. Variazioni del peso possono riflettere alterazioni della nutrizione, del bilancio idroelettrolitico, o di entrambi.

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Le quantità percentuali della massa magra e del grasso corporeo cambiano. Nonostante questi cambiamenti legati all'età, l'indice di massa corporea IMC è ancora utile nei pazienti anziani, anche se l'obesità è sottovalutata. La circonferenza vita e il rapporto vita-fianchi sono invece stati utilizzati. Se vengono identificate anomalie nell'anamnesi nutrizionale p. Preziose informazioni sulla funzionalità di un paziente possono essere ottenute osservando il paziente.

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Valutazione geriatrica globale La valutazione geriatrica globale calcoli nella prostata e nella vescica original song list un processo multidimensionale finalizzato a valutare la capacità funzionale, la salute fisica, cognitiva e mentalee la situazione socio-ambientale degli anziani.

La valutazione geriatrica globale valuta in modo specifico e a fondo le capacità funzionali e cognitive, il sostegno sociale, lo stato finanziario, e i fattori ambientali, oltre che la salute fisica e mentale. Idealmente, un esame corretto dei pazienti anziani comprende molti aspetti della valutazione geriatrica globale, rendendo i 2 approcci molto simili. I risultati della valutazione sono abbinati ad interventi individuali specifici p. Il costo della valutazione geriatrica ne limita l'uso.

Valutazione del paziente anziano

I membri della famiglia possono anche chiedere un deferimento per la valutazione geriatrica. La valutazione geriatrica globale è più efficace quando viene condotta da un gruppo interdisciplinare geriatrico in genere un geriatra, un infermiere, un assistente sociale e un farmacista. Di solito, le valutazioni vengono effettuate in un ambiente ambulatoriale. Tuttavia, i pazienti con disabilità fisiche o mentali e i pazienti affetti da malattie croniche possono richiedere una valutazione in regime di ricovero.

Livello di calcoli nella prostata e nella vescica original song list nel mangiare, vestirsi, lavarsi, spostarsi fra letto e sedia, utilizzare il bagno, e controllare vescica e intestino. Grado di difficoltà nel preparare i pasti, fare i lavori domestici, assumere i farmaci, andare a fare commissioni p.

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Utilizzo di dispositivi ambientali p. Stabilità del peso p. Regolarità delle misurazioni della pressione arteriosa, test al guaiaco per il sangue occulto nelle feci, sigmoidoscopia o colonscopiavaccinazioni influenza, pneumococco, tetanovalutazione dell'ormone stimolante la tiroide, cure dentali.

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Abilità funzionale: vengono valutate le capacità di svolgere attività di base e strumentali della vita quotidiana. Le attività della vita quotidiana comprendono mangiare, vestirsi, lavarsi, spostarsi dal letto alla sedia, utilizzare il bagno, controllare vescica e intestino.

Le attività della vita quotidiana strumentali consentono a una persona di vivere indipendentemente e comprendono prepararsi i pasti, effettuare lavori domestici, assumere i farmaci, andare in giro, gestire le proprie finanze, usare il telefono.

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Salute fisica: l'anamnesi e l'esame obiettivo devono comprendere i problemi più diffusi tra gli anziani p. Funzioni cognitive e salute mentale: possono essere utilizzati diversi test di screening validati per la disfunzione cognitiva p.

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Situazione socio-ambientale: vengono valutate la rete di interazione sociale del paziente, la disponibilità di risorse di supporto sociale, le esigenze speciali, la sicurezza e la comodità dell'ambiente del paziente, spesso da un infermiere o da https://gowin.shop/cuoco/23-08-2019.php assistente sociale. Tali fattori influenzano l'approccio terapeutico utilizzato. Gli strumenti standardizzati rendono la valutazione di questi domini più affidabile ed efficiente Strumento di valutazione geriatrica.

Facilitano anche la comunicazione di informazioni cliniche tra il personale sanitario e il monitoraggio delle modificazioni delle condizioni del paziente nel tempo. Binghamton, Calcoli nella prostata e nella vescica original song list, Haworth Press,pp. Tutti i diritti riservati.

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If the problem continues, please let us know and we'll try to help. An unexpected error occurred. Issue doi: Orthotopic pre-clinical models of androgen-dependent and castration-resistant prostate cancer are critical to study the disease calcoli nella prostata e nella vescica original song list the context of a clinically relevant tumor microenvironment and an immunocompetent host.

La valutazione degli anziani di solito differisce da una valutazione medica standard.

Anker, J. Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and transgenic genetically engineered mouse models.

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Unlike subcutaneous tumors, orthotopic tumors contain more clinically accurate vasculature, tumor microenvironment, and responses to multiple therapies. In contrast to genetically engineered mouse models, orthotopic models can be performed with lower cost and in less time, involve the use of highly complex and heterogeneous mouse or human cancer cell lines, rather that single genetic alterations, and these cell lines can be genetically modified, such as to express imaging agents.

Here, we present a protocol to surgically injecting a luciferase- and mCherry-expressing murine prostate cancer cell line into the anterior prostate lobe of calcoli nella prostata e nella vescica original song list. These mice developed orthotopic tumors that were non-invasively monitored in vivo and further analyzed for tumor volume, weight, mouse survival, and immune infiltration.

Further, orthotopic tumor-bearing mice were surgically castrated, leading to immediate tumor regression and subsequent recurrence, representing castration-resistant prostate cancer. Although technical skill is required to carry out this procedure, this syngeneic orthotopic model of both androgen-dependent and castration-resistant prostate cancer is of great use to all investigators in the field.

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Prostate cancer is estimated to calcoli nella prostata e nella vescica original song list the highest incidencemen and cause the third-most male cancer deaths 84, men in 1.

At this stage, approved therapies include docetaxel, Sipuleucel-T immunotherapy, and the anti-androgen small molecules enzalutamide and abiraterone, yet no individual therapy confers a survival benefit of more than 5. Therefore, men at all stages of prostate cancer need both improved treatment options and management of morbidities, for which optimal pre-clinical disease modeling is crucial.

With correct procedure, prostate cancer cell lines can be surgically instilled into the murine prostate, leading to the development of both syngeneic or xenogeneic orthotopic tumors.

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Orthotopic tumor modeling is ideal for all tumor biology and drug development research, allowing for tumor development with a clinically representative tumor microenvironment TME. Prior studies have demonstrated that subcutaneous s. In addition, multiple studies have observed increased or decreased efficacy of multiple chemotherapeutics in treating the same cell line, depending on whether it was administered s.

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Further, only in an orthotopic model of colon cancer, but not in the s. Finally, as immunotherapies continue to emerge at the forefront of cancer therapy, and especially as they have yet to provide significant benefit for prostate cancer 2425syngeneic pre-clinical models with accurate TME and draining lymph nodes in immunocompetent hosts are critical. There are many factors responsible for these inconsistent findings based on tumor site. With a different TME, cancer link are exposed to different tissue-specific endothelium and altered angiogenesis, thereby affecting tumor development 26 Orthotopic tumors with the correct TME allow for clinically relevant calcoli nella prostata e nella vescica original song list delivery, hypoxic conditions, and evaluation of anti-angiogenic therapies While genetically engineered models GEMs do contain an accurate TME, they require long times for breeding, high cost, and are often based on manipulations of single or few genes knocked out or overexpressed beyond clinically relevant levels.

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In contrast, the human or murine prostate cancer cell lines used in orthotopic tumors, like human tumors, are much more genetically complex both within single cells and in displaying heterogeneity between cells 29 Also unlike GEMs, orthotopic cancer cell lines can be engineered to express imaging modalities or increased or decreased levels of other molecules of interest, and in vitro and in vivo experimental results can be directly compared.

Orthotopic tumors can also be formed from primary patient-derived cells.

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Here, we report the methodology for performing intra-prostatic injections of prostate cancer cells that form orthotopic androgen-dependent tumors, and, after castration, recur as orthotopic CRPC. All of the animal procedures outlined in this protocol are to be performed in compliance with ethical regulations and the approval of the appropriate university Institutional Animal Care and Use Committee IACUC. NOTE: House mice in the university animal facility for at least one week before surgery to allow for adequate adaptation and to minimize animal stress.

Steps 2. All subsequent surgical steps are performed by the surgeon using sterile gloves and calcoli nella prostata e nella vescica original song list tools with sterile technique. NOTE: Perform all surgical steps under sterile conditions.

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Adjusting the microscope, the mouse placement, or any other non-sterile objects must be done by the surgeon assistant. In this manuscript, we surgically injected the murine prostate cancer cell line, Myc-CaP, into the anterior prostate lobe Figure 1Aleading to the development of orthotopic prostate tumors with a clinically relevant TME and the correct prostate-draining lymph nodes Figure 1B.

To monitor the orthotopic tumor calcoli nella prostata e nella vescica original song list, we stably transfected Myc-CaP cells to express both firefly luciferase and mCherry, allowing for tumors to click followed by non-invasive in vivo bioluminescence Figure 2A and fluorescence Figure 2Brespectively. One limitation of this imaging is that, depending on the strength of the signal, imaging quantification may saturate while the tumor continues to increase in size.

Therefore, with high signal intensities, this in vivo imaging is more useful for initially normalizing tumor burden across experimental groups and for later determining decreases in tumor size after experimental treatments.

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Orthotopic tumors were dissected from the abdomen on day 30 after intra-prostatic injection Figure 3A. Orthotopic tumors should be located at the site of the anterior prostate lobe. Tumor masses throughout the abdomen or attached to the anterior abdominal wall indicate improper intra-prostatic injection and leakage.

With proper technique, tumor volume Figure 3B and weight Figure 3C can be recorded with relatively small standard error. However, as observed, there will be some variability with small and large tumor masses. Therefore, initial use of pre-treatment imaging quantification to equalize tumor burden between experimental arms is critical for all experiments.

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Occasionally, death may also be caused by tumor growth blocking urine output. Finally, this model can be utilized to study both androgen-dependent prostate cancer and CRPC, the latter of which confers poor prognosis and is in need of novel treatment options.

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After orthotopic tumor development, mice were surgically calcoli nella prostata e nella vescica original song list, as previously described As this is the second major survival surgery, extra care must be given to monitor for recovery and any adverse events or complications.

Within 3 days after castration, strong tumor regression was observed, followed by subsequent tumor recurrence after approximately 30 days, representing CRPC Figure 4A. CRPC tumors can be dissection and analyzed histologically, and do not display any neuroendocrine differentiation, as they maintain high AR levels and are negative for the neuroendocrine marker, synaptophysin Figure 4B.

Figure 1: Anterior prostate lobe, draining lymph nodes, and representative technique for intra-prostatic cell injections. Please click here to view a larger version of this figure.

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Figure 2: In vivo bioluminescent and fluorescent tumor imaging. Figure 3: Orthotopic tumor analyses by tumor volume, weight, histology for immune infiltration, and survival.

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Figure 4: Intra-prostatic injections with subsequent surgical castration to model both androgen-dependent prostate cancer and CRPC. In this manuscript we outline the protocol to perform surgical intra-prostatic cancer cell injections. This cell line was stably transduced to express both luciferase and mCherry, for non-invasive in vivo bioluminescent and fluorescent tumor imaging, respectively.

Further, surgical castration was also performed after androgen-dependent tumor development, leading to tumor regression and subsequent recurrence.

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Therefore, we provide details to model both orthotopic androgen-dependent prostate cancer and CRPC in an immunocompetent host. Myc-CaP cells were injected into the anterior prostate lobe of mice. The mouse prostate consists of the anterior, ventral, and dorsolateral prostate lobes, and the human prostate consists of a peripheral zone, transitional zone, and central zone within a single lobe While prior studies have anatomically and histologically calcoli nella prostata e nella vescica original song list the dorsolateral mouse lobe to the human peripheral zone, the site of the majority of prostate cancers 41and the anterior mouse lobe to the human central zone 4243more recent and comprehensive analysis has demonstrated that the anterior lobe and dorsolateral lobe display closely related gene expression patterns, as compared to the ventral lobe.

Using s. This may calcoli nella prostata e nella vescica original song list due to the altered vasculature of s. On the contrary, orthotopic tumors develop with a proper TME, draining lymph nodes, and vasculature, and can be performed with murine cell lines, thereby also allowing for analysis of tumor immunology and response to immunotherapies.

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Calcoli nella prostata e nella vescica original song list GEMs develop tumors with a proper TME in an immunocompetent host, yet these models typically oversimplify human cancer by developing tumors with single or few genetic alterations An analysis of Myc-CaP and other prostate cancer cell lines revealed that they contained much greater somatic copy number alterations and chromosomal alterations than tumors from the Hi-Myc mice and other GEMs from which they were derived Further, GEMs are limited by the increased cost and time needed for mice breeding to perform experiments of sufficient power.

Orthotopic tumor modeling can overcome these limitations. Human and murine prostate cancer cell lines contain many genetic alterations relevant to human disease 29and, like human cancer, also show great heterogeneity between individual cells Orthotopic murine syngeneic tumors allow for immunological analyses, while orthotopic human xenogeneic tumors allow for analyses of therapeutics on human cells.

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Finally, unlike with GEMs, cell lines can be modified before injection, allowing for expression of bioluminescent or fluorescent imaging molecules to monitor tumor growth, normalize tumor burden among experimental groups, monitor response to treatment, and to follow tumor regression and CRPC recurrence after surgical castration. The major limitation of intra-prostatic injections is attaining the technical skill required to minimize tumor variability between mice.

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This is especially important for modeling CRPC, which has the added variable of surgical castration. Intra-prostatically injected and castrated mice must also be followed closely for recovery and adverse events, as they have undergone two major survival surgeries.

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Another limitation is the time of each intra-prostatic injection. This can be reduced to as low as 20 min, and the surgeon assistant can prepare the next mouse as the current mouse is being sutured.

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Finally, orthotopic Myc-CaP tumors are aggressive, fast growing tumors that reach the survival endpoint in approximately 46 days and as early as 35 days due to the primary tumor mass. Studies requiring slower tumor development or long-term treatments should be optimized empirically for the initial injection cell count and treatment regimen.

In contrast to the limitations of s. As the orthotopic tumor model involves the use of in vitro -handled cells, these cells can be modified depending on the needs of the study. Here, we modified these cells to stably express luciferase calcoli nella prostata e nella vescica original song list mCherry for in vivo tumor monitoring.

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With the advantages of the orthotopic tumor model, the ability to study both androgen-dependent prostate cancer and CRPC, and the potential to express imaging modalities or knockdown or overexpress select genes, this protocol serves as a valuable resource for all prostate cancer research. You must be signed in to post a comment. Please sign in or create an account. This content is Open Access.

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